誘導培養基有什么特點(diǎn)？
（1）針對特定種屬細胞優(yōu)化的培養體系；
（2）多個(gè)方向誘導：成骨、成脂、成軟骨、成肝、成神經(jīng)元、成星形膠質(zhì)、EB形成等；
（3）性能穩定，誘導分化效果好。
為了提高溶解度，最常使用哪些標簽？最常使用什么標簽進(jìn)行純化？
通常，我們在使用哺乳動(dòng)物表達產(chǎn)生重組蛋白時(shí)不會(huì )遇到不溶性問(wèn)題。大多數時(shí)候，哺乳動(dòng)物細胞中產(chǎn)生的蛋白質(zhì)是完全加工的分泌蛋白質(zhì)，因此沒(méi)有不溶性問(wèn)題。對于困難蛋白質(zhì)諸如膜蛋白，我們通常使用含有去污劑的商業(yè)試劑來(lái)裂解細胞以用于檢測和定量目的。常規使用的標簽包括His標簽、Fc融合標簽和Flag標簽。
內毒素是如何控制的？金斯瑞的內毒素水平能做到什么標準？
蛋白部原核系統去除內毒素有三個(gè)水平<1EU/μg（1000EU/mg）、<0.1EU/μg（100EU/mg）、 <0.01EU/μg（10EU/mg），1EU/mg較難做到，哺乳動(dòng)物細胞表達系統做到1EU/mg容易一些，抗體可以做到0.5EU/mg，應用于小鼠的典型控內毒蛋白需求是<3 EU/mg，應用于人的典型控內毒蛋白需求是<1 EU/mg。哺乳動(dòng)物細胞表達的內控標準是10EU/mg，但金斯瑞不默認檢測內毒素含量，如果客戶(hù)要求最終提供內毒素QC數據，如果客戶(hù)有內毒素控制需求，需要在實(shí)驗開(kāi)始前提出。 通過(guò)控制試劑，容器以及表達純化過(guò)程中的內毒素引入來(lái)控制內毒素水平。如果內毒素水平仍然較高，可以通過(guò)去內毒的柱子或是離子柱進(jìn)一步去除。
抗體純化你們采用什么純化方法？
一般采用Protein A或者Protein G純化。
蛋白表達過(guò)程中，雜質(zhì)有些什么？如何去除這些雜質(zhì)？金斯瑞內部有哪些蛋白純化方法？如何選擇使用哪種純化方法？多步純化常用純化流程？
能提供親和純化，離子交換層析，疏水層析和分子篩層析。雜質(zhì)大多是細胞內或培養基內的物質(zhì)，可以通過(guò)層析技術(shù)去除。
一般對于含有親和標簽的蛋白，首選親和層析后根據得到的蛋白純度以及雜蛋白的位置性質(zhì)，相應選擇多步純化的步驟。
干細胞傳代的注意事項有哪些？
（1）胰酶濃度：推薦胰酶使用濃度為0.25%-0.04%EDTA，使用之前需預熱至37℃且pH值應維持在7.2左右。切忌消化過(guò)度（包括胰酶濃度過(guò)高、消化時(shí)間過(guò)長(cháng)等），否則會(huì )導致細胞死亡、分化、狀態(tài)變差，分化能力丟失等現象。細胞消化過(guò)程中需要在顯微鏡下觀(guān)察細胞的消化程度，當看到大部分細胞變圓不貼壁，拍打培養瓶?jì)蓚葧?huì )有大量細胞脫落，此時(shí)應立即終止消化，若細胞仍有大部分貼壁，可適當延長(cháng)消化時(shí)間以避免消化不徹底的情況出現。
（2）細胞的差異：不同種類(lèi)的干細胞差異很大，特別是與腫瘤細胞株的差異更大，很多經(jīng)驗不可以直接使用，消化時(shí)需要仔細摸索最佳的時(shí)間。
（3）接種密度：干細胞傳代過(guò)程中接種密度至關(guān)重要，如果太低會(huì )導致細胞增殖緩慢，甚至導致細胞老化，而細胞的老化是不可逆轉的。一般細胞接種密度為20000個(gè)活細胞/cm2即50 0000個(gè)活細胞/T25，不同的干細胞接種密度會(huì )稍有差異，比如hMSC，我們推薦的傳代接種比例為1:2。
血清融解后或者配制成完全培養基后出現絮狀沉淀是什么原因？
培養基出現的絮狀物是血清融解過(guò)程中所釋出的蛋白，不同批次的培養基蛋白釋出的情況也不同，屬于正?，F象。
細胞和培養基的保存條件及時(shí)間？
細胞：細胞接收之后請檢查干冰、細胞冷凍管是否有融化、解凍情形，若有請及時(shí)聯(lián)系我公司銷(xiāo)售人員。如不馬上復蘇必須立即置于液氮保存，保存時(shí)間可長(cháng)達幾年。
培養基：添加物和基礎培養基按照標簽所示溫度分開(kāi)保存時(shí)間為1年；混合之后必須避光保存在2-8℃，推薦在一個(gè)月內使用完。同時(shí)減少敞開(kāi)蓋子的時(shí)間，避免培養基pH變化導致使用效果不佳。
蛋白的分子量（MW）對蛋白生產(chǎn)有影響嗎？
金斯瑞的蛋白服務(wù)能表達分子量10-250KD的蛋白（大腸桿菌系統：150KD；其它系統：250KD）。生產(chǎn)更大分子量的蛋白會(huì )越來(lái)越困難，因為分子量過(guò)大的蛋白在表達時(shí)極易降解或者表達困難。
對于抗體制備，對抗原蛋白是否有特殊要求？
抗原（蛋白）需要溶于PBS或者其他的不含有機溶劑的緩沖液中?？乖鞍滓话愀驇撕灒ㄈ?xHis，HA，FLAG，V5，c-myc）。對于單克隆抗體的制備，要求蛋白抗原含量應大于2mg，純度大于75％。用于診斷型或功能型單克隆抗體的開(kāi)發(fā)的抗原，需要更高的純度，一般需要85％-90％的純度；對于多克隆抗體的制備，蛋白抗原含量應大于4mg，純度大于85％（如需獲得純化的多克隆抗體，則請另外提供5mg抗原蛋白）。濃度一般要求>0.4mg/ml。
